Onlangs is er een betrouwbare, zeer gevoelige en snelle methode ontwikkeld voor het diagnosticeren van verschillende menselijke infectieziekten. Deze methode wordt "PCR-analyse" genoemd. Wat is het, wat is de essentie, welke micro-organismen kan het onthullen en hoe het correct te nemen, zullen we in ons artikel vertellen.
Ontdekkingsgeschiedenis
De uitvinder van de polymerasekettingreactie (PCR)-methode door de Amerikaanse wetenschapper Kary Mullis in 1983. Aanvankelijk werd de diagnostische methode gepatenteerd door de Cetus Corporation, waarin de maker ervan werkte. Maar in 1992 werden alle rechten en patenten verkocht aan Hoffman-La Roche. Daarna bleek dat soortgelijke onderzoeken parallel werden uitgevoerd en werden vastgelegd door andere Amerikaanse biologen, zoals Alice Chen, David Edgar, John Trell. In 1980 hebben Sovjetwetenschappers A. Slyusarenko, A. Kaledin en S. Gorodetsky zich ook met dit probleem beziggehouden. Daarom was het onmogelijk om de enige auteursrechthebbende te bepalen. Veel vooraanstaande biochemici hebben een zekere bijdrage geleverd aan de ontwikkeling van de polymerasekettingreactietechniek en hebben hun innovaties gepatenteerd. Op dit moment is de analysePCR wordt overal uitgevoerd in speciaal uitgeruste laboratoria.
De essentie van de PCR-diagnosemethode
PCR-analyse: wat is het en hoe werkt het? De essentie van de methode is om het volume van een bepaalde microbiële omgeving onder kunstmatige omstandigheden te vergroten met behulp van een speciaal DNA-polymerase-enzym. Hiervoor wordt het bestaande DNA-materiaal vele malen vermenigvuldigd. Dus, in aanwezigheid van een pathogeen micro-organisme in het monster, zal de hoeveelheid ervan worden verhoogd als gevolg van biochemische laboratoriummanipulaties, en het zal niet moeilijk zijn om de bacterie onder een microscoop te detecteren.
Hoe wordt materiaalonderzoek gedaan?
Vereist voor analyse:
- DNA-matrix;
- primers die de uiteinden van een stuk materiaal verbinden;
- hittebestendig DNA-polymerase-enzym;
- chemicaliën die enzymen goed laten werken;
- bufferoplossing die nodig is om de juiste omstandigheden te creëren voor de groei en ontwikkeling van DNA-materiaal.
Om PCR uit te voeren, worden 25-30 herhalingen uitgevoerd, bestaande uit drie fasen: denaturatie, annealing en verlenging.
Voor de analyse van de polymeerkettingreactie wordt een speciaal apparaat gebruikt - een versterker. Met moderne apparatuur kunt u het benodigde programma voor het verwarmen en koelen van buizen instellen om fouten tijdens de diagnose te elimineren.
Waar wordt diagnostiek gebruikt?
De polymeerkettingreactiemethode wordt op verschillende medische gebieden gebruikt:
- criminelen methet identificeert genetisch materiaal zoals haar, speeksel of bloed;
- PCR-bloedtest helpt bij genotypering, bijvoorbeeld om een individuele genetisch inherente reactie op een bepaald medicijn te detecteren;
- deze methode gebruiken om de aanwezigheid van familiebanden tussen mensen vast te stellen;
- De meest populaire PCR-methode is geworden in de medische diagnostiek om verschillende infectieziekten te bepalen.
Welke infecties detecteert PCR?
De geneeskunde maakt dus al lang en met succes gebruik van PCR-analyse. Wat het is, weten we al. En welke ziekteverwekkers kunnen ermee worden opgespoord? De volgende infectieziekten worden gediagnosticeerd met de PCR-methode:
- hepatitis A, B, C;
- ureaplasmose;
- candidiasis;
- chlamydia;
- mycoplasmose;
- gardnerellose;
- infectieuze mononucleosis;
- trichomoniasis;
- papilomavirus-infectie;
- tuberculose;
- herpes infectie type 1 en 2;
- helicobacteriose;
- cytomegalovirus;
- difterie;
- salmonellose;
- HIV-infectie.
Er worden ook PCR-methoden gebruikt bij de diagnose van kanker.
Methode voordelen
PCR-diagnostiek heeft verschillende voordelen:
- Hoge gevoeligheid. Zelfs in de aanwezigheid van slechts enkele moleculen van micro-organisme-DNA, bepa alt PCR-analyse de aanwezigheid van infectie. De methode helpt bij chronische en latent voorkomende ziekten. Vaak is in dergelijke gevallen het micro-organismeis anders niet te cultiveren.
- Elk materiaal is geschikt voor onderzoek, zoals speeksel, bloed, genitale afscheidingen, haar, epitheelcellen. De meest voorkomende is de analyse van bloed en urogenitale uitstrijkjes voor PCR.
- Geen langdurige oogst vereist. Het geautomatiseerde diagnostische proces stelt u in staat om de resultaten van het onderzoek na 4-5 uur te krijgen.
- De methode is bijna 100% betrouwbaar. Er zijn alleen geïsoleerde gevallen van fout-negatieve resultaten geregistreerd.
- Het vermogen om verschillende soorten pathogenen te identificeren uit een enkel materiaalmonster. Dit versnelt niet alleen het proces van het diagnosticeren van de ziekte, maar vermindert ook aanzienlijk de materiaalkosten. Vaak schrijft de arts een uitgebreide PCR-analyse voor. De prijs van het onderzoek, dat bestaat uit de bepaling van zes pathogenen, is ongeveer 1500 roebel.
Aanbevelingen voor het voorbereiden van analyse
Om ervoor te zorgen dat de resultaten betrouwbaar zijn tijdens het PCR-onderzoek, moet u de test doen, volgens de aanbevelingen voor de voorbereidende voorbereiding op de diagnose:
- Voordat u speeksel doneert, mag u 4 uur voor de monstername niet eten en geen medicijnen gebruiken. Spoel direct voor de ingreep uw mond met gekookt water.
- De bovenstaande regels moeten ook worden gevolgd bij het nemen van een monster van het binnenoppervlak van de wang. Na het spoelen wordt aanbevolen om een lichte huidmassage uit te voeren om de afscheiding van de klier te benadrukken.
- Urine wordt meestal thuis verzameld. Om dit te doen, moet je een grondig toilet uitvoerengeslachtsdelen. Verzamel 50-60 ml urine in een steriele plastic container. Om de zuiverheid van het materiaal te waarborgen, wordt aanbevolen voor vrouwen om een tampon in de vagina in te brengen en voor mannen om de huidplooi zoveel mogelijk terug te trekken. Doneer niet tijdens je menstruatie.
- Als u sperma wilt doneren, moet u zich gedurende 3 dagen vóór het afnemen van geslachtsgemeenschap onthouden van geslachtsgemeenschap. Artsen raden ook af om naar de sauna te gaan en een warm bad te nemen, alcohol en pittig eten te drinken. U mag 3 uur voor de test niet plassen.
- Voor het nemen van een urogenitaal uitstrijkje, bijvoorbeeld als er een PCR-test wordt uitgevoerd op chlamydia, wordt zowel vrouwen als mannen geadviseerd om 3 dagen seksuele rust te nemen. Antibacteriële geneesmiddelen mogen niet 2 weken voor de analyse worden ingenomen. Een week lang moet u stoppen met het gebruik van intieme gels, zalven, vaginale zetpillen, douchen. 3 uur voor het onderzoek mag u niet plassen. Tijdens de menstruatie wordt er geen monster genomen, pas 3 dagen na het stoppen van de bloedafvoer kunt u een urogenitaal uitstrijkje maken.
PCR tijdens zwangerschap
Tijdens de periode van verwachting van de baby zijn veel seksueel overdraagbare aandoeningen extreem gevaarlijk voor de normale ontwikkeling van de foetus. SOA's kunnen intra-uteriene groeivertraging, miskraam of vroeggeboorte, aangeboren afwijkingen van het kind veroorzaken. Daarom is het uiterst belangrijk om vroeg in de zwangerschap een PCR-onderzoek te ondergaan. Het is noodzakelijk om de analyse door te geven bij registratie - tot 12 weken.
Het materiaal wordt met een speciale borstel uit het baarmoederhalskanaal gehaald. De procedure is pijnloos en vormt geen gevaar voor de baby. Gewoonlijk wordt tijdens de zwangerschap een analyse uitgevoerd voor chlamydia door de PCR-methode, evenals voor ureaplasmose, mycoplasmose, cytomegalovirus, herpes, papillomavirus. Zo'n complex van onderzoeken wordt PCR-6 genoemd.
PCR voor hiv-diagnose
Omdat de polymerasekettingreactiemethode erg gevoelig is voor veranderingen in het lichaam en de omstandigheden van de diagnose, kunnen veel factoren het resultaat beïnvloeden. Daarom is PCR-analyse voor HIV-infectie geen betrouwbare methode, de efficiëntie is 96-98%. In de overige 2-4% van de gevallen geeft de test vals-positieve resultaten.
Maar in sommige situaties is hiv-PCR-diagnostiek onmisbaar. Het wordt meestal gegeven aan mensen met een vals-negatief ELISA-resultaat. Dergelijke indicatoren geven aan dat een persoon nog geen antilichamen tegen het virus heeft ontwikkeld en dat ze niet kunnen worden gedetecteerd zonder een meervoudige toename van het aantal. Dit is precies wat kan worden bereikt door een PCR-bloedtest uit te voeren.
Deze diagnostiek is ook nodig voor kinderen in het eerste levensjaar die geboren zijn uit een hiv-positieve moeder. De methode is de enige manier om op betrouwbare wijze de status van een kind te bepalen.
PCR voor het diagnosticeren van hepatitis
Met de polymerasekettingreactiemethode kan het DNA van het hepatitis A-, B- en C-virus worden gedetecteerd lang voordat er antilichamen tegen de infectie worden gevormd of de symptomen van de ziekte optreden. PCR-analyse voor hepatitis C is bijzonder effectief, aangezien deze ziekte in 85% van de gevallen asymptomatisch is en zondertijdige behandeling komt in de chronische fase.
Tijdige detectie van de ziekteverwekker helpt complicaties en langdurige behandeling te voorkomen.
Uitgebreid PCR-onderzoek
Complexe PCR-analyse: wat is het? Dit is een onderzoek met behulp van de polymere kettingreactiemethode, waarbij gelijktijdig verschillende soorten infecties worden vastgesteld: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes type 1 en 2, gonorroe, papillomavirus. De prijs van dergelijke diagnostiek varieert van 2000 tot 3500 roebel. afhankelijk van de kliniek, de gebruikte materialen en apparatuur, evenals van het type analyse: kwalitatief of kwantitatief. Wat in uw geval nodig is - de arts zal beslissen. In sommige gevallen is het voldoende om alleen de aanwezigheid van de ziekteverwekker te bepalen, in andere, bijvoorbeeld bij HIV-infectie, speelt een kwantitatieve titer een belangrijke rol. Wanneer alle bovengenoemde pathogenen worden gediagnosticeerd, wordt het onderzoek "PCR-12-analyse" genoemd.
Transcript van analyseresultaten
Het ontcijferen van de PCR-analyse is niet moeilijk. Er zijn slechts 2 schalen van de indicator - "positief resultaat" en "negatief resultaat". Wanneer een ziekteverwekker wordt gedetecteerd, kunnen artsen de aanwezigheid van de ziekte met 99% zekerheid bevestigen en beginnen met de behandeling van de patiënt. Met een kwantitatieve methode voor het bepalen van infectie, geeft de bijbehorende kolom de numerieke indicator van gedetecteerde bacteriën aan. Alleen een arts kan de omvang van de ziekte bepalen en de noodzakelijke behandeling voorschrijven.
In sommige gevallen, bijvoorbeeld bij het bepalen van HIV-infectie door PCR, met een negatief resultaat, wordt het noodzakelijk om aanvullende onderzoeken uit te voeren om de verkregen indicatoren te bevestigen.
Waar te laten testen?
Waar een PCR-test doen: in een openbare kliniek of in een privélaboratorium? Helaas zijn in gemeentelijke medische instellingen de apparatuur en methoden vaak verouderd. Daarom is het beter om de voorkeur te geven aan particuliere laboratoria met moderne apparatuur en hooggekwalificeerd personeel. Bovendien krijgt u in een privékliniek veel sneller resultaten.
In Moskou bieden veel particuliere laboratoria PCR-analyse aan voor verschillende infecties. In klinieken als Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro wordt bijvoorbeeld PCR-analyse uitgevoerd. De prijs van het onderzoek is vanaf 200 roebel. voor het identificeren van één pathogeen.
Er kan worden geconcludeerd dat de diagnose van infectieziekten door PCR in de meeste gevallen een snelle en betrouwbare manier is om de ziekteverwekker in het lichaam in de vroege stadia van infectie op te sporen. Maar toch is het in bepaalde gevallen de moeite waard om andere diagnostische methoden te kiezen. Alleen een specialist kan de noodzaak van een dergelijk onderzoek bepalen. Het ontcijferen van de PCR-analyse vereist ook een professionele aanpak. Volg het advies van uw arts op en doe geen tests die u niet nodig heeft.
