Colorimetrische methode - een analyse gebaseerd op een vergelijking van de kleurverzadiging van de onderzochte en bekende stoffen. De resultaten van fysische en chemische tests zijn van grote waarde voor vele takken van wetenschap, maar het onderzoek wordt vooral gebruikt in de geneeskunde.
De essentie van de colorimetrische methode
Er zijn veel soorten tests die de chemische samenstelling van stoffen bepalen. Sommige zijn universeel en worden veel gebruikt op verschillende gebieden, andere zijn specifiek, met een hogere nauwkeurigheid. De colorimetrische methode is universeel.
De essentie van de analyse ligt in het feit dat de kleurverzadiging van een oplossing met een onbekende concentratie wordt vergeleken met de kleur van een standaardoplossing. Tijdens de analyse wordt door de interactie van de onderzochte component met een bepaald reagens een gekleurde verbinding gevormd. Na voltooiing van de reactie wordt de resulterende tint vergeleken met de kleur van de oplossingen, waarvan de concentratie al bekend is.
Er wordt aangenomen dat Robert Boyle de grondlegger van colorimetrie is. Hij gebruikte squeezetannines om ijzer van koper in oplossing te onderscheiden. Het was Boyle die opmerkte dat hoe groter de ijzerconcentratie in de oplossing, hoe rijker de toon van de oplossing.
Colorimetrie
Colorimetrie is een methode om de hoeveelheid van een stof in oplossingen te bepalen. De analyse is gebaseerd op de wet van Bouguer-Lambert-Beer: wanneer een lichtstraal een dichte absorberende laag van een stof raakt, wordt de intensiteit ervan zwakker.
De colorimetrische methode voor het bepalen van de concentratie van een stof kan een visuele vergelijking of vergelijking met speciale instrumenten gebruiken om de kleurintensiteit te meten. De vergelijking wordt gemaakt op een directe en compenserende manier.
- Recht. De methode omvat het vergelijken van het kleurniveau van de testoplossing bij een bepaalde dichtheid en temperatuur van de vloeistof met een referentieoplossing. Bij gebruik van fotocolorimeters en spectrofotometers wordt gedestilleerd water als referentieoplossing gebruikt. De apparaten meten de intensiteit van de stroom, die afhangt van de intensiteit van het licht.
- Compenserend. De methode is gebaseerd op het brengen van de kleur van het bestudeerde monster naar het referentiemonster. Het resultaat wordt bereikt door een oplosmiddel toe te voegen of de hoogte van de laag van het gekleurde medium te vergroten.
Het gebruik van een spectrofotometer, monochromator en andere precisie-instrumenten vereenvoudigt de toch al eenvoudige onderzoeksmethode verder en stelt u in staat de nauwkeurigheid van de resultaten te vergroten. Deze apparaten kunnen de hoeveelheid lichttransmissie meten en de golflengte bepalen.
Waar analyse wordt toegepast
Colorimetrische analysemethode wordt gebruikt wanneer de exacte chemische samenstelling bekend is, er een referentiemonster ter vergelijking is en de temperatuur van het test- en referentiemonster hetzelfde is. Als u snel de hoeveelheid van een gekleurde stof moet bepalen, maar deze is zo klein dat het onmogelijk is om de analytische methode toe te passen.
Colorimetrie wordt veel gebruikt in de geneeskunde voor klinisch biochemisch onderzoek en andere gebieden:
- farmaceutische industrie;
- voedsel- en alcoholindustrie;
- agronomie (bepaling van bodemkwaliteit).
Voors en tegens
De colorimetrische methode heeft, net als elke andere, voor- en nadelen.
De voordelen zijn onder meer:
- gemakkelijke analyse, minimale voorbereidende procedures;
- mogelijkheid om te testen, zelfs met een kleine hoeveelheid testmateriaal;
- er is geen noodzaak voor dure apparatuur, hoewel moderne apparaten die niet goedkoop zijn de laatste tijd steeds meer worden gebruikt. Maar ze geven het meest nauwkeurige resultaat.
Nadelen: lage analysenauwkeurigheid in vergelijking met analytische methoden.
Biureetmethode voor eiwitbepaling
Eiwit in bloedserum is een indicator die de staat van homeostase weerspiegelt. Een verhoging van de concentratie van een macromoleculaire verbinding in het bloed wordt hyperproteïnemie genoemd, een laag geh alte wordt hypoproteïnemie genoemd.
Eiwitten inbloedserum hebben een andere samenstelling, structuur, eigenschappen, verschillende functies vervullen. Ze zijn onderverdeeld in enzymen, hormonen, immunoglobulinen en andere. Alle groepen eiwitten hebben een aantal gemeenschappelijke kenmerken, op basis waarvan methoden zijn ontwikkeld voor de bepaling van macromoleculaire organische verbindingen in biologische vloeistoffen.
Van alle methoden in de klinische biochemie worden colorimetrische methoden voor het bepalen van eiwitten het vaakst gebruikt. Ze zijn relatief goedkoop, wat belangrijk is voor budgetorganisaties. en zijn vrij eenvoudig. De meest voorkomende is de biureetmethode. De essentie van de methode: eiwitten in een alkalische omgeving reageren met kopersulfaat en vormen paarse verbindingen. Het eiwitgeh alte in het bloed wordt bepaald door de verzadiging van de kleuring. Biomateriaal voor analyse wordt 's ochtends op een lege maag ingenomen.
De analyse is zeer nauwkeurig, maar er zijn factoren die de eiwitconcentratie in het bloed beïnvloeden:
- fysieke activiteit kort voor de bemonstering van biomateriaal;
- laatste weken dracht en lactatie;
- het gebruik van de medicijnen Corticotropin, Miscleron, Clofibrate verhoogt het eiwitgeh alte in het bloed, en het gebruik van Pyrazinamide en oestrogeen - om de concentratie te verlagen;
- verkeerde handpositie tijdens bemonstering van biomateriaal.
Bepaling van ijzer
De hoeveelheid ijzer in het bloed is een van de belangrijkste indicatoren bij de diagnose van verschillende ziekten. De stof is geconcentreerd in hemoglobine, dat zorgt voor het transport van zuurstof naar de weefsels. Voorbepaling van ijzer door de colorimetrische methode, meestal wordt een oplossing van bathofenantroline (0,02%) als het belangrijkste reagens gebruikt. Biomateriaal - serum zonder sporen van hemolyse.
De essentie van de methode: de interactie van ferro-ionen en gesulfateerd bathofenantroline vormt een gekleurd complex waarvan de verzadiging fotometrisch wordt bepaald. Om een heldere oplossing te verkrijgen, is het noodzakelijk om de regels voor het nemen van monsters van het biomateriaal te volgen, maar om de optische dichtheden van ijzer-ligandcomplexen nauwkeurig te bepalen, wordt ijzer uit hemoglobine vrijgemaakt met behulp van hydroxylamine en detergentia (natriumdodecylsulfaat). Het testresultaat bepa alt de aanwezigheid en mate van pathologie. De normale ijzerconcentratie moet zijn:
- 14, 2 – 26,0 µmol/L (mannen);
- 10, 6- 21, 7 µmol/L (vrouwen).
Ijzertekort wordt meestal geassocieerd met bloedverlies, onvoldoende inname via de voeding of slechte opname uit het maagdarmkanaal.
Cholesteroltest
Cholesterol is een organische stof die in de celwand van veel organismen, waaronder mensen, wordt aangetroffen. Het is noodzakelijk voor de aanmaak van cholecalciferol en steroïde hormonen. Een cholesterolgeh alte van 3,37-5,2 mmol/L wordt als normaal beschouwd. Verhoogde inhoud is een van de belangrijkste oorzaken van atherosclerose.
Colorimetrische methoden voor het bepalen van cholesterol stellen je in staat om vaatziekten in een vroeg stadium te herkennen. Volgens pathoanatomische resultaten in dodelijke afloop van ischemie, de concentratie van lipofiele alcohol bij patiëntenwas 6,5-7,8 mmol/L.
Het principe van de colorimetrische methode is dat cholesterol wordt geoxideerd door 3beta-hydroxy-steroïde oxidoreductase, waarbij waterstofperoxide vrijkomt, dat p-aminoatipyrine omzet in een gekleurde verbinding. Het geh alte aan cholesterol wordt bepaald door de verzadiging van de kleur.
Bij het uitvoeren van een test bij een kind moet er rekening mee worden gehouden dat de cholesterolconcentratie in de kindertijd niet hoger mag zijn dan 4,1 mmol / l.
Wat is de enzymatische colorimetrische methode?
Enzymatische tests zijn gebaseerd op het gebruik van reacties door enzymen met een hoge activiteit. Ze worden veel gebruikt in de analytische chemie om verschillende stoffen te bepalen - van nitraationen tot macromoleculen.
Enzymatische (enzymatische) methoden zijn specifiek, waardoor de analyse van bepaalde stoffen in aanwezigheid van andere stoffen met een vergelijkbare samenstelling mogelijk is. De meest gebruikelijke methoden zijn gebaseerd op het gebruik van het enzym - glucose-oxidase. De test wordt gebruikt om de glucoseconcentratie in het bloed te bepalen. Door de nauwkeurigheid van de test kan deze worden gebruikt om de dosering van bloedglucoseverlagende middelen bij patiënten met diabetes type 2 aan te passen.
Glucose oxidant methode wordt beschouwd als een van de beste kwantitatieve methoden voor het bepalen van glucose. Zowel bloed (capillair) als serum kunnen als biomateriaal worden gebruikt, maar plasma heeft meer de voorkeur omdat het een lager hematocrietgeh alte heeft, wat de nauwkeurigheid van het resultaat negatief beïnvloedt.
De kinetische methode van fotometrie wordt voornamelijk gebruikt. De essentie ervan ligt in het feit dat:de vastgestelde verhouding van glucose-oxidase en peroxidase, gedurende een bepaalde tijd na het begin van de reactie, zal de vormingssnelheid van een gekleurde verbinding evenredig zijn met het glucosegeh alte in het monster. Het belangrijkste voordeel van de test is dat het resultaat niet wordt beïnvloed door de aanwezigheid van verbindingen van derden in het monster. De methode heeft ook een nadeel: voor de test zijn dure meetinstrumenten van Duitse of Zweedse fabrikanten nodig.
Conclusie
De colorimetrische methode is nauwkeurig en gemakkelijk te gebruiken. Het gebruik ervan in de geneeskunde maakt vroege detectie van verschillende pathologische veranderingen in het lichaam mogelijk. Met de introductie van nieuwe technologieën wordt de methode verbeterd en steeds populairder.
