De studie van bacteriën is van groot praktisch belang voor de mens. Tot op heden is een groot aantal prokaryoten ontdekt, die van elkaar verschillen in pathogeniteit, verspreidingsgebied, vorm, grootte, aantal flagellen en andere parameters. Om deze stam in detail te bestuderen, wordt een bacteriologische onderzoeksmethode gebruikt.
Wat zijn de methoden voor het analyseren van bacteriële cellen?
Om te bepalen of bacteriën pathogeen zijn, wordt de kweek op verschillende manieren onderzocht. Onder hen:
1. Bacterioscopische methode.
2. Bacteriologische methode.
3. Biologische methode.
Bacterioscopische en bacteriologische onderzoeksmethoden zijn direct gebaseerd op het werken met prokaryotische cellen, wanneer biologische analyse nodig is om het effect van dergelijke cellen op het levende organisme van proefdieren te bestuderen. Afhankelijk van de mate van manifestatie van bepaalde tekenen van de ziekte, kan de wetenschapper maken:conclusie over de aan- of afwezigheid van pathogene bacteriën in het monster, en om ze op natuurlijke wijze in het lichaam van het dier te verspreiden om hun kweek te verkrijgen en te gebruiken in andere werken.
De bacteriologische onderzoeksmethode verschilt van bacterioscopisch. In de eerste wordt een speciaal voorbereide kweek van levende prokaryoten gebruikt voor analyse, terwijl in de tweede wordt gewerkt met dode of levende cellen op een glasplaatje.
Stappen van de bacteriologische onderzoeksmethode. Microbiologie
Het principe van het bestuderen van de eigenschappen van een bacteriecultuur kan zowel nuttig zijn voor microbiologen die zich tot doel hebben gesteld prokaryotische cellen te bestuderen, als voor laboratoriumtechnici wiens taak het is om de pathogeniteit of niet-pathogeniteit van bacteriën vast te stellen, en diagnosticeer vervolgens de patiënt.
De methode om bacteriën te bestuderen is verdeeld in drie fasen:
1. Isolatie van bacteriën uit het originele monster.
2. Bacteriën zaaien en een zuivere cultuur kweken, de eigenschappen ervan bestuderen.
3. Gedetailleerde studie van bacteriële cellen.
Eerste etappe
Het monster, of uitstrijkje, wordt genomen van het vrije oppervlak van het medium of van de patiënt. Zo krijgen we een "cocktail" van vele soorten bacteriën die gezaaid moeten worden op een voedingsbodem. Soms wordt het mogelijk om de noodzakelijke bacteriën onmiddellijk te isoleren, wetende waar ze zich in het lichaam verspreiden.
Na twee of drie dagen worden de gewenste kolonies geselecteerd enworden gezaaid op vaste media van petrischalen met behulp van een steriele lus. Veel laboratoria werken met reageerbuizen, die vaste of vloeibare voedingsmedia kunnen bevatten. Zo zit de bacteriologische onderzoeksmethode in de microbiologie in elkaar.
Tweede etappe
Na het verkrijgen van individuele kolonies bacteriën, wordt een directe macro- en microanalyse uitgevoerd. Alle parameters van de kolonies worden gemeten, de kleur en vorm van elk van hen wordt bepaald. Het is niet ongebruikelijk om kolonies te tellen op een petrischaal en vervolgens in het uitgangsmateriaal. Dit is belangrijk bij de analyse van pathogene bacteriën, waarvan het aantal afhangt van de mate van de ziekte.
Bacteriologische onderzoeksmethode, waarvan de 2e fase het bestuderen van individuele kolonies van micro-organismen is, kan worden geassocieerd met een biologische methode voor het analyseren van bacteriën. Een ander doel van het werken in dit stadium is om de hoeveelheid bronmateriaal te vergroten. Dit kan op een voedingsbodem, of je kunt een experiment in vivo uitvoeren op levende experimentele organismen. Pathogene bacteriën zullen zich vermenigvuldigen en als gevolg daarvan zal het bloed miljoenen prokaryotische cellen bevatten. Het is gemakkelijk om het benodigde werkmateriaal van bacteriën uit het afgenomen bloed te bereiden.
Derde etappe
Het belangrijkste onderdeel van het onderzoek is de bepaling van de morfologische, biochemische, toxigene en antigene eigenschappen van de bacteriecultuur. Er wordt gewerkt met voorgereinigde culturen op een voedingsbodem, evenals met preparaten (vaak gekleurd) onder een microscoop.
Eigendom instellenpathogene of opportunistische bacteriën voor een of andere systematische groep, evenals om hun resistentie tegen geneesmiddelen te bepalen, maakt de bacteriologische onderzoeksmethode mogelijk. Fase 3 - antibiotica, d.w.z. analyse van het gedrag van bacteriële cellen in de omstandigheden van de inhoud van geneesmiddelen in de omgeving.
De studie van antibioticaresistentie van een kweek is van groot praktisch belang wanneer het nodig is om de noodzakelijke en vooral effectieve medicijnen voor een bepaalde patiënt voor te schrijven. Dit is waar de bacteriologische onderzoeksmethode kan helpen.
Wat is een groeimedium?
Voor ontwikkeling en reproductie moeten bacteriën zich in vooraf voorbereide voedingsmedia bevinden. Door consistentie kunnen ze vloeibaar of vast zijn, en van oorsprong - plantaardig of dierlijk.
Basismediavereisten:
1. Steriliteit.
2. Maximale transparantie.
3. Optimale indicatoren van zuurgraad, osmotische druk, wateractiviteit en andere biologische waarden.
Het verkrijgen van geïsoleerde kolonies
1. Drygalsky-methode. Het bestaat uit het feit dat een uitstrijkje met verschillende soorten micro-organismen op de bacteriële lus wordt aangebracht. Deze lus wordt met een voedingsbodem langs de eerste petrischaal geleid. Verder, zonder de lus te veranderen, wordt de methode van restmateriaal uitgevoerd op de tweede en derde petrischaal. Dus, op de laatste monsters van de kolonie, zullen de bacteriën niet te dicht worden gezaaid, waardoor het vermogen om de noodzakelijke voor het werk te vinden wordt vereenvoudigd.bacteriën.
2. Koch methode. Het maakt gebruik van reageerbuizen met gesmolten voedingsbodem. Daar wordt een lus of pipet met een uitstrijkje van bacteriën geplaatst, waarna de inhoud van het reageerbuisje op een speciaal bord wordt gegoten. Agar (of gelatine) stolt na enige tijd en het is gemakkelijk om de gewenste celkolonies in zijn dikte te vinden. Het is belangrijk om het mengsel van bacteriën in reageerbuizen te verdunnen voordat u met de werkzaamheden begint, zodat de concentratie van micro-organismen niet te hoog wordt.
De bacteriologische onderzoeksmethode, waarvan de stadia gebaseerd zijn op de isolatie van de gewenste bacteriecultuur, kan niet zonder deze twee methoden voor het vinden van geïsoleerde kolonies.
Antbiogram
Visueel kan de reactie van bacteriën op medicijnen op twee praktische manieren worden gezien:
1. Papieren schijf methode.
2. Bacteriën en antibiotica kweken in een vloeibaar medium.
De papieren schijf-methode vereist een kweek van micro-organismen die op een vast voedingsmedium zijn gekweekt. Leg op zo'n medium een paar stukjes rond papier gedrenkt in antibiotica. Als het medicijn de neutralisatie van bacteriële cellen met succes aankan, zal er na een dergelijke behandeling een gebied zijn zonder kolonies. Als de reactie op het antibioticum negatief is, zullen de bacteriën overleven.
In het geval van gebruik van een vloeibare voedingsbodem, bereidt u eerst verschillende reageerbuizen voor met een kweek van bacteriën met verschillende verdunningen. Aan deze reageerbuizen wordt antibiotica toegevoegd en gedurende de dag wordt het proces van interactie tussen de stof en micro-organismen waargenomen. Als resultaat wordt een antibiogram van hoge kwaliteit verkregen, volgens welke het mogelijk is om:beoordeel de effectiviteit van het medicijn voor een bepaald gewas.
Hoofdtaken van analyse
Hier worden de doelen en stadia van de bacteriologische onderzoeksmethode vermeld.
1. Verkrijg het uitgangsmateriaal dat zal worden gebruikt om bacteriële kolonies te isoleren. Het kan een uitstrijkje zijn van het oppervlak van een voorwerp, slijmvlies of holte van een menselijk orgaan, een bloedtest.
2. Teelt van cultuur op een vaste voedingsbodem. Na 24-48 uur zijn er kolonies van verschillende soorten bacteriën op de petrischaal te vinden. We selecteren de gewenste op basis van morfologische en / of biochemische criteria en werken er verder mee.
3. Voortplanting van de resulterende cultuur. De bacteriologische onderzoeksmethode kan gebaseerd zijn op een mechanische of biologische methode om het aantal bacterieculturen te vergroten. In het eerste geval wordt gewerkt met vaste of vloeibare voedingsmedia, waarop bacteriën zich in een thermostaat vermenigvuldigen en nieuwe kolonies vormen. De biologische methode vereist natuurlijke omstandigheden om het aantal bacteriën te vergroten, dus hier raakt het proefdier besmet met micro-organismen. Na een paar dagen zijn er veel prokaryoten te vinden in een bloedmonster of uitstrijkje.
4. Werken met gezuiverde cultuur. Om de systematische positie van bacteriën te bepalen, evenals hun behoren tot pathogenen, is het noodzakelijk om een grondige analyse van cellen uit te voeren volgens morfologische en biochemische kenmerken. Bij het bestuderen van pathogene groepen micro-organismen is het belangrijk om te weten:hoe effectief zijn antibiotica.
Dit was een algemeen kenmerk van de bacteriologische onderzoeksmethode.
Kenmerken van de analyse
De hoofdregel van bacteriologisch onderzoek is maximale steriliteit. Als u met reageerbuizen werkt, mogen culturen en subculturen van bacteriën alleen worden uitgevoerd boven een verwarmde spirituslamp.
Alle stadia van de bacteriologische onderzoeksmethode vereisen het gebruik van een speciale lus of een pasteurpipet. Beide gereedschappen moeten worden voorbehandeld in de vlam van een alcohollamp. Wat betreft de Pasteur-pipet, hier, vóór thermische sterilisatie, is het noodzakelijk om de punt van de pipet af te breken met een pincet.
De techniek van het zaaien van bacteriën heeft ook zijn eigen kenmerken. Ten eerste wordt bij het enten op vaste media een bacteriële lus over het oppervlak van de agar geleid. De lus moet natuurlijk al een monster van micro-organismen op het oppervlak hebben. Inoculatie in het kweekmedium wordt ook beoefend, in welk geval de lus of pipet de bodem van de petrischaal moet bereiken.
Bij het werken met vloeibare media worden reageerbuisjes gebruikt. Hier is het belangrijk om ervoor te zorgen dat vloeistoffen de randen van laboratoriumglaswerk of stoppen niet raken en dat de gebruikte instrumenten (pipet, lus) geen vreemde voorwerpen en oppervlakken raken.
Het belang van de biologische onderzoeksmethode
Bacteriënmonsteranalyse heeft zijn praktische toepassingen. voornamelijkbacteriologische onderzoeksmethode kan worden gebruikt in de geneeskunde. Het is bijvoorbeeld noodzakelijk om de microflora van de patiënt te bestuderen om de juiste diagnose te stellen en om de juiste behandelingskuur te ontwikkelen. Een antibiogram helpt hier, dat de activiteit van medicijnen tegen de ziekteverwekker zal laten zien.
Analyse van bacteriën wordt in het laboratorium gebruikt om gevaarlijke ziekten zoals tuberculose, recidiverende koorts of gonorroe op te sporen. Het wordt ook gebruikt om de bacteriële samenstelling van de amandelen, orgaanholten te bestuderen.
Bacteriologische onderzoeksmethode kan worden gebruikt om de verontreiniging van het milieu te bepalen. Volgens de gegevens over de kwantitatieve en kwalitatieve samenstelling van een uitstrijkje van het oppervlak van een object, wordt de mate van populatie van deze omgeving door micro-organismen bepaald.
